Тест ELISA виявляє численні захворювання, саме тому він знайшов широке застосування в медицині тощо. Однак тест ELISA найбільш відомий завдяки діагностиці хвороби Лайма. Що таке тест ІФА? Як інтерпретувати результати? Яка ціна тесту?
Зміст:
- Тест ІФА - що він виявляє? Застосування тесту ІФА
- ІФА тест - що таке тест?
- Тест ІФА та хвороба Лайма - коли проводити?
- ІФА тест - ціна. Скільки коштує тест ІФА?
- Тест ІФА - результати. Чи можуть вони бути помилковими спрацьовуваннями?
- Тест ІФА - результати. Чи можуть вони бути помилково негативними?
Тест ELISA, тобто імуноферментний аналіз, є загальновживаним лабораторним методом, який, серед іншого, служить: для кількісного виявлення антитіл у крові.
З цієї причини тест ELISA застосовували для діагностики бактеріальних захворювань, таких як лайм-бореліоз.
Перевагою методу ІФА є його простота та можливість швидкого впровадження, а також висока чутливість. Метод ІФА проводиться за допомогою спеціальних пластикових пластин із лунками, заповненими, наприклад, білками Borrelia (антигенами) та специфічними моноклональними антитілами, які призначені для виявлення антитіл у зразку пацієнта.
Тест ІФА - що він виявляє? Застосування тесту ІФА
Висока чутливість та простота методу ІФА зробили його застосовним у діагностиці багатьох захворювань, але він найбільш відомий як метод діагностики хвороби Лайма.
У разі діагностики лаймського бореліозу т. Зв непрямий ІФА, що дозволяє виявити специфічний IgM або IgG у досліджуваному матеріалі. Таким же чином для діагностики можна виявити антитіла:
- вірусні інфекції: віруси герпесу (герпес, вірус оперізувального герпесу, Епштейн-Барр, цитомегаловірус), ВІЛ, віруси гепатиту (HBV та HCV)
- найпростіші інфекції: токсоплазмоз, лямбліоз
- аутоімунні захворювання: целіакія (анти-tTG або анти-DPG антитіла), хвороба Хашимото (анти-TG та анти-TPO антитіла), запальні захворювання кишечника (анти-ASCA та анти-ANCA антитіла)
- паразитарні захворювання та алергії, при яких виявляються специфічні антитіла IgE. Їх підвищений рівень може свідчити про наявність алергії, наприклад, на пилок та їжу, або про паразитну інвазію (озброєний солітер, людський аскарид)
Існують також модифікації методу ІФА (так званий сендвіч ІФА), які дозволяють виявити зразок білків, відмінних від антитіл. Тоді метою тесту є виявлення в біологічному матеріалі:
- фрагменти вірусів або бактерій, найчастіше вони є антигенами, характерними для даного збудника
- сироваткові гормони, наприклад, естроген, пролактин, ТТГ, fT4, кортизол
- ферменти, наприклад кальпротектин, еластаза підшлункової залози, лужна фосфатаза
- онкомаркери, наприклад СА-125
- наявність ліків у сироватці крові
Цей метод також застосовується в харчовій промисловості, де він може виявити сліди алергенів (наприклад, молока, арахісу), ГМО або токсинів у продуктах харчування.
ІФА тест - про що мова?
Наприклад, діагностика, наприклад, лайм-бореліозу методом ІФА полягає у виявленні імунних білків у біологічному матеріалі - антитіл, що виникають під час відповіді на антигени боррелії.
Антитіла тестують у двох класах, IgM та IgG. IgM - це перші антитіла, які з’являються в організмі при контакті з бактеріями, і вони з часом зменшуються.
Їх місце займають більш стійкі антитіла IgG, які можуть залишатися в організмі кілька десятків років.
Таким чином, наявність бактерій в організмі опосередковано перевіряється шляхом виявлення антитіл, спеціально спрямованих проти спірохет боррелії.
Антитіла на різних стадіях зараження можуть бути спрямовані проти різних білків боррелії. Наприклад, на ранній стадії це білок р41.
На пізніх стадіях починає з’являтися все більше білків, таких як p21, p30, p39, p43. Це причина, чому діагностика хвороби Лайма надзвичайно складна.
Відбір бактеріальних білків надзвичайно важливий, щоб тест мав високу діагностичну цінність. Тому регулярно при діагностиці хвороби Лайма слід використовувати тести ІФА II або III покоління, в яких відбираються набори білків для отримання найбільш достовірного результату.
ІФА-тест та хвороба Лайма. Коли робити?
Лаймський бореліоз - це бактеріальне захворювання, спричинене бактеріями Borrelia burgdorferi та багатьма її різновидами.
Діагностика захворювання не проста через складність імунної відповіді проти борелії та недосконалість лабораторних методів.
Найбільш часто використовуваним лабораторним методом є високочутливий метод ІФА, який виявляє специфічні антитіла, виділені проти бактеріальних білків.
У діагностиці хвороби Лайма використовується непрямий метод ІФА, при якому виділяють такі стадії:
- інкубація лунок на пластині матеріалом, зібраним у пацієнта, наприклад сироваткою. Якщо в досліджуваному матеріалі є антитіла проти боррелії, вони зв’язуються з білками на дні реакційної лунки
- потім надлишки сироватки змиваються спеціальною миючою рідиною (буфером) і т. зв кон’югат, який є ферментно-зв’язаним антитілом, яке зв’язується з раніше зв’язаними антитілами в реакційних ямах
- потім додається субстрат для кон’югату і виникає кольорова реакція (позитивний результат) або відсутність кольорової реакції (негативний результат)
- останній крок - зчитування зчитувачем (спектрофотометром) концентрації антитіл проти боррелії в сироватці крові пацієнта
Метод ІФА при хворобі Лайма проводиться з крові, а у разі неврологічних симптомів (нейроборреліоз) також із ліквору.
Не слід тестувати синовіальну рідину, оскільки існує велика ймовірність хибнопозитивних результатів.
В основі діагностики захворювання лежать клінічні симптоми, що вказують на це, підтверджені результатами лабораторних досліджень.
Додавання результату лабораторного дослідження без симптомів не дозволяє діагностувати хворобу Лайма, оскільки було доведено, що антитіла проти боррелії виявляються також у здорових людей.
Серологічна діагностика лайм-бореліозу починається з напівкількісного скринінгового ІФА-тесту. Якщо результат негативний, це означає, що спірохети боррелії не виявлені або результат хибно негативний.
Якщо результат є позитивним або слабо позитивним (двозначним), слід провести підтверджувальне тестування Вестерн-блот, яке характеризується високою специфічністю.
Це підтверджує "правдивість" результатів, отриманих методом ІФА. Під час діагностики ви не можете пропустити жоден з вищезазначених кроків і, наприклад, негайно провести діагностику методом Вестерн-блот або поставити діагноз лише на основі позитивного результату ІФА.
У Польщі діагностика хвороби Лайма дуже часто закінчується на першому етапі скринінгу, що спричиняє помилкове тлумачення позитивних або слабко позитивних результатів.
Рекомендована стаття:
Тест на трансформацію лімфоцитів (LTT) Корисно знатиІФА тест - ціна. Скільки коштує тест ІФА?
Тест коштує близько 60 злотих і проводиться відразу. Однак ви можете почекати близько трьох місяців на результати направлення.
Тест ІФА - результати. Чи можуть вони бути помилковими спрацьовуваннями?
Помилково позитивні результати є результатом перехресної реактивності антитіл IgM з іншими білками. Антитіла, що виробляються організмом, можуть "неправильно" розпізнати антиген від інших мікроорганізмів як антиген боррелії.
Найпоширеніші «помилки» трапляються у людей, інфікованих блідою трепонемою, герпесвірусами, а також у людей із системною червоною вовчаком та іншими ревматичними захворюваннями.
Тест ІФА - результати. Чи можуть вони бути помилково негативними?
Помилково негативні результати можуть з’явитися на ранній стадії зараження, і в цьому випадку тест слід повторити приблизно через 3-4 тижні. Це називається серологічне вікно, тобто початковий період зараження, в якому організм ще не «зумів» продукувати специфічні антитіла.
Те саме стосується людей з імунодефіцитом, які не виробляють достатньої кількості антитіл.
Великою проблемою, особливо при дуже інтенсивних інфекціях, є поява т.зв. імунні комплекси, що складаються з антигенів боррелії та специфічних для них антитіл.
В результаті антитіла стають "невидимими" для загальновживаних методів, таких як ІФА, і хоча вони присутні в досліджуваному матеріалі, їх неможливо виявити.
У таких випадках лабораторія може використовувати руйнуючі імунні комплекси. Це лікування призначене для вивільнення антитіл. Однак цей метод не використовується широко через відсутність стандартизації в лабораторіях.
Варто знатиЧому діагностика хвороби Лайма не проста?
Це пов’язано зі складністю імунної відповіді проти борелії та обмеженнями лабораторних методів. Різноманітність сортів та поява нових, що викликають інфекції, особливо на європейському континенті, не сприяють розробці ефективних методів діагностики.
Нещодавно в Європі з’явилося більше сортів, таких як Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana та Borrelia spielmanii. Крім того, в організмі спірохети боррелії можуть перетворюватися на цисти або перебувати в місцях тіла, недоступних для клітин імунної системи.
Будучи таким чином "невидимим" для імунної системи. Крім того, було показано, що тканини можуть містити фрагменти бактерій, що мають сильно прозапальні властивості. Вважається, що вони відповідають за хронічні симптоми хвороби Лайма, незважаючи на негативні результати лабораторних досліджень.
Література
1. Witecka-Knysz E. та ін. Хвороба Лайма: чому діагностика така важка? Лабораторний діагностик, квітень 2007 р.
2. Moore A. et al. Поточні рекомендації, загальні клінічні підводні камені та майбутні вказівки щодо лабораторної діагностики хвороби Лайма, США. Emerg Infect Dis. 2016 липень; 22 (7).
3. Лабораторна діагностика кліщових захворювань Рекомендації робочої групи: Національна палата лабораторних діагностиків, Національний інститут громадського здоров’я-Національний інститут гігієни, Національний консультант у галузі інфекційних хвороб, Департамент інфекційних хвороб та нейроінфекцій, Медичний університет м. Білосток, Польське товариство вірусологів, Варшава 2014
4. Хоссейні С. та ін.: Імуноферментний аналіз (ІФА) від А до Я. Springer 2017.
