Проточна цитометрія - це діагностична та дослідницька методика, відома вже багато років і широко застосовується в онкології. Проточна цитометрія дозволяє досліджувати клітини, що утворюють суспензію в ламінарному або багатошаровому потоці рідини, за допомогою пристрою, який називається проточним цитометром. Які показання до проточної цитометрії та як це робиться?
Проточна цитометрія використовується для діагностики гематологічних новоутворень, оскільки вони є рідкими пухлинами, але це лише допоміжний метод. Однак варто пам’ятати, що існує один рак, який можна діагностувати лише за допомогою цього методу. Це хронічний лімфолейкоз.
При інших пухлинних захворюваннях проточна цитометрія використовується як діагностичний засіб, оскільки вона виявляє дуже важливі особливості новоутворених клітин. Цей метод також використовується для оцінки ефективності застосовуваного лікування.
Проточна цитометрія - що вона показує?
Потік рідини, що містить випробовувані частинки, пропускається з постійною швидкістю (100-2000 частинок в секунду) через вимірювальну площу цитометра. Тут оптичні методи аналізують форми, розміри, внутрішню будову клітин та їх вміст, наприклад ДНК. Всі клітини мають оптичну мітку.
Вимірювання базуються на властивостях розсіяння лазерного світла окремими клітинами або їх компонентами (ядрами, хромосомами, мітохондріями) або індукованою ними флуоресценцією.
Оптичні сигнали перетворюються в електричні сигнали, які після аналізу графічно подаються у вигляді моно- або біпараметричного розподілу.
Цитометр також забезпечує сегрегацію частинок після виходу із зони вимірювання. Можна сказати, що апарат влаштовує (відокремлює) клітини з однаковими складовими елементами (препаративне сортування) або ізолює певні типи клітин (аналітичне сортування).
Проточна цитометрія дозволяє вивчати популяційні характеристики клітин, аналіз клітинних компонентів (особливо таких, як нуклеїнові кислоти, білки, поверхневі та клітинні антигени), ферментативну активність, мембранний потенціал, мітохондріальну активність, внутрішньоклітинний рН, транспорт іонів та плинність мембрани.
Проточна цитометрія - застосування
Проточна цитометрія, яка використовується в діагностиці, дозволяє визначити фенотип новоутворених клітин та експресію окремих білків. Для цього використовуються мічені флуоресцентні антитіла, які характерним чином пов'язуються з антигенами на поверхні клітинної мембрани. Завдяки цьому можна визначити ступінь їх диференціації, походження, прогностичні та терапевтичні маркери, які полегшують прийняття рішення про подальші діагностичні та терапевтичні процедури.
Ще одним застосуванням проточної цитометрії є моніторинг ефективності застосовуваного лікування шляхом оцінки т.зв. "залишкова хвороба", тобто частка клітин з пухлиноподібними фенотипами, які залишаються після лікування.
Проточна цитометрія також полегшує дослідження раку. Завдяки цьому методу можна шукати, наприклад, рецептори, які знаходяться на поверхні новоутворених клітин і можуть стати мішенями для лікування.
Метод дозволяє оцінити активність білків всередині клітини. Також можна оцінити клітинний цикл, наприклад, визначивши кількість ДНК у клітині.
В процесі проліферації клітина проходить крізь клітинний цикл фази, де подвоює кількість ДНК. Оцінивши цю кількість, можна вказати, в якій фазі перебувають клітини, чи проліферують вони чи ні, чи вони переходять в апоптоз. Іншими словами, за допомогою проточної цитометрії можна дізнатися, чи готуються клітини до апоптозу, запрограмованого процесу смерті.
Проточна цитометрія - майбутнє
Проточна цитометрія відома і застосовується в медицині вже кілька десятиліть. Однак воно постійно вдосконалюється і створює нові діагностичні та дослідницькі можливості. У перший період використання цього методу було можливо лише визначити розмір і ступінь зернистості клітин.
Використання лазерного світла в приладах проточної цитометрії дозволяє збуджувати певні флуоресцентні маркери, а потім оцінювати їх випромінювання. Сучасні цитометри дозволяють суттєво збільшити кількість маркерів, які оцінюються одночасно, що однозначно перетворюється на підвищення чутливості цього методу.
Ось чому його використовують не тільки для діагностики новоутворень, але і для оцінки ефективності лікування.
Про автора
Прочитайте більше статей цього автора
